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传代细胞 *
点击次数:758 更新时间:2015-05-21

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无菌操作
无菌室的灭菌:
1.定期打扫无菌室:每周打扫一次,先用自来水拖地、擦桌子、超净工作台等,然后用3‰来苏尔或者新洁尔灭或者0.5%过氧乙酸擦拭。
2.CO2孵箱(培养箱)灭菌:先用3‰新洁尔灭擦拭,然后用75%酒精擦拭或者0.5%过氧乙酸,再用紫外灯照射
3.实验前灭菌:打开紫外灯、三氧杀菌机、空气净化器系统各20-30分钟
4.实验后灭菌:用75%酒精(3‰新洁尔灭)擦拭超净台、边台、倒置显微镜的载物台。
实验人员的无菌准备:
1.肥皂洗手。
2.穿好隔离衣、带好隔离帽、口罩、放好拖鞋
3.用75%酒精棉球擦净双手。
无菌操作的演示:
1.凡是带入超净工作台内的酒精、PBS、培养基、胰蛋白酶的瓶子均要用75%酒精擦拭瓶子的外表面
2.靠近酒精灯火焰操作。
3.器皿使用前必须过火灭菌
4.继续使用的器皿(如瓶盖、滴管)要放在高处,使用时仍要过火。
5.各种操作要靠近酒精灯,动作要轻、准确,不能乱碰。如吸管不能碰到废液缸。
6.吸取两种以上的使用液时要注意更换吸管,防止交叉污染。


平底和圆底(U型和V型)培养板的区别和选择:
贴壁细胞一般用平底培养板。
悬浮型细胞的培养一般用V型。

U型培养板亦多用于培养悬浮型细胞 。

V型培养板有时用做免疫学血凝集的实验。
不同型状的板子自然有不同用途。平底的什麼类型的细胞都可用﹐但当细胞数目较少﹐如做克隆时﹐就用96孔平底板﹐另外﹐做MTT等实验时﹐无论贴壁和悬浮细胞﹐一般均用平底板。至於U或V型板﹐一般在某些特殊要求时才使用。

免疫学方面﹐当做两种不同淋巴细胞混合培养时﹐需要二者相互接触以刺激﹐因此﹐一般需要U型板﹐因细胞会由於重力的作用而聚集在一个很小的范围内。
V型板的用途更少﹐一般用于细胞杀伤实验时﹐為了使效靶细胞紧密接触﹐常使用V型板﹐但这种试验也可用U型板替代(加入细胞后﹐低速离心)
如果是养细胞的话, 通常是选用平底的, 另外要特别注意材质, 标示%26quot;Tissue Culture (TC) Treated%26quot;就是养细胞用的。
圆底的好像没听说过拿来养细胞。 圆底的通常是拿来做分析, 化学反应, 或是保存样品用的, 因為圆底比较好将液体吸得乾净, 如果用平底的就不好吸了。 不过, 如果你是要测吸光值的话, 一定要买平底的才行。

常用设备

准备室的设备:
单蒸馏水蒸馏器、双蒸馏水蒸馏器、酸缸、烤箱、高压锅、储品柜(放置未消毒物品)、储品规(放置消毒过的物品)、包装台。配液室的设备:扭力天平和电子天平(称量药品)、PH计(测量培养用液PH值)、磁力搅拌器(配置溶液室搅拌溶液)。
培养室的设备:
液氮罐、储品柜(存放杂物)、日光灯和紫外灯、空气净化器系统、低温冰箱(-80℃)、空调、二氧化碳缸瓶、边台(书写实验记录)。必须放在无菌间的设备:离心机(收集细胞)、超净工作台、倒置显微镜、CO2孵箱(孵育培养物)、水浴锅、三氧消毒杀菌机、4℃冰箱(放置serum和培养用液)。

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