传代细胞 * 细胞信息(说明书,鉴定书),售后情况,细胞活动请 : : : :tongpaibio 提供耐药细胞株,细胞染色等技术服务。 复苏细胞下单后的1-2周内到货,冻存细胞2天内到货 无菌操作 无菌室的灭菌: 1.定期打扫无菌室:每周打扫一次,先用自来水拖地、擦桌子、超净工作台等,然后用3‰来苏尔或者新洁尔灭或者0.5%过氧乙酸擦拭。 2.CO2孵箱(培养箱)灭菌:先用3‰新洁尔灭擦拭,然后用75%酒精擦拭或者0.5%过氧乙酸,再用紫外灯照射 3.实验前灭菌:打开紫外灯、三氧杀菌机、空气净化器系统各20-30分钟 4.实验后灭菌:用75%酒精(3‰新洁尔灭)擦拭超净台、边台、倒置显微镜的载物台。 实验人员的无菌准备: 1.肥皂洗手。 2.穿好隔离衣、带好隔离帽、口罩、放好拖鞋 3.用75%酒精棉球擦净双手。 无菌操作的演示: 1.凡是带入超净工作台内的酒精、PBS、培养基、胰蛋白酶的瓶子均要用75%酒精擦拭瓶子的外表面 2.靠近酒精灯火焰操作。 3.器皿使用前必须过火灭菌 4.继续使用的器皿(如瓶盖、滴管)要放在高处,使用时仍要过火。 5.各种操作要靠近酒精灯,动作要轻、准确,不能乱碰。如吸管不能碰到废液缸。 6.吸取两种以上的使用液时要注意更换吸管,防止交叉污染。 平底和圆底(U型和V型)培养板的区别和选择: 贴壁细胞一般用平底培养板。 悬浮型细胞的培养一般用V型。
U型培养板亦多用于培养悬浮型细胞 。 V型培养板有时用做免疫学血凝集的实验。 不同型状的板子自然有不同用途。平底的什麼类型的细胞都可用﹐但当细胞数目较少﹐如做克隆时﹐就用96孔平底板﹐另外﹐做MTT等实验时﹐无论贴壁和悬浮细胞﹐一般均用平底板。至於U或V型板﹐一般在某些特殊要求时才使用。 免疫学方面﹐当做两种不同淋巴细胞混合培养时﹐需要二者相互接触以刺激﹐因此﹐一般需要U型板﹐因细胞会由於重力的作用而聚集在一个很小的范围内。 V型板的用途更少﹐一般用于细胞杀伤实验时﹐為了使效靶细胞紧密接触﹐常使用V型板﹐但这种试验也可用U型板替代(加入细胞后﹐低速离心) 如果是养细胞的话, 通常是选用平底的, 另外要特别注意材质, 标示%26quot;Tissue Culture (TC) Treated%26quot;就是养细胞用的。 圆底的好像没听说过拿来养细胞。 圆底的通常是拿来做分析, 化学反应, 或是保存样品用的, 因為圆底比较好将液体吸得乾净, 如果用平底的就不好吸了。 不过, 如果你是要测吸光值的话, 一定要买平底的才行。 常用设备
准备室的设备: 单蒸馏水蒸馏器、双蒸馏水蒸馏器、酸缸、烤箱、高压锅、储品柜(放置未消毒物品)、储品规(放置消毒过的物品)、包装台。配液室的设备:扭力天平和电子天平(称量药品)、PH计(测量培养用液PH值)、磁力搅拌器(配置溶液室搅拌溶液)。 培养室的设备: 液氮罐、储品柜(存放杂物)、日光灯和紫外灯、空气净化器系统、低温冰箱(-80℃)、空调、二氧化碳缸瓶、边台(书写实验记录)。必须放在无菌间的设备:离心机(收集细胞)、超净工作台、倒置显微镜、CO2孵箱(孵育培养物)、水浴锅、三氧消毒杀菌机、4℃冰箱(放置serum和培养用液)。
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