人肺癌细胞 A549细胞传代细胞 细胞信息(说明书,鉴定书),售后情况,细胞活动请 : : : :tongpaibio 提供耐药细胞株,细胞染色等技术服务。 复苏细胞下单后的1-2周内到货,冻存细胞2天内到货 多孔塑料培养板单细胞克隆法: 消化:取健康待克隆细胞,吸出瓶内培养液,加消化液。 低密度细胞悬液的制备:做克隆细胞时首先需先用消化法制备出分散成单个细胞悬液,然后稀释细胞,使之成为1~2细胞/毫升悬液,zui适宜细胞密度为 1~2 细胞/ml 培养液。 接种:先用吸管轻轻吹打细胞悬液,使混悬均匀,继用加样器向塑料培养板每孔内 加0.5毫升。接种时要迅速准确,争取在zui短时间内加完,以免培养液蒸发,然后迅速盖好 盖板,置CO2温箱培养。 标记:培养6~12小时后,待细胞下沉冰贴附于培养板孔底后,从温箱中取出,置 倒置光显微镜台上,观察和标记下含有单个细胞的孔,置 CO2 温箱培养。在培养中一般无 需换液,只有在细胞增长过于缓慢时才可进行换液。换液时先吸除旧培养基,但不要吸除过 多,余少许,以免细胞干涸。然后再迅速补加新鲜克隆培养液,继续培养 3~4 周。待孔内细 胞增至500~600个时,可进行分离培养。 人肺癌细胞 A549细胞传代细胞 分离扩大培养:培养86~96小时后进行观察。挑选生长良好的单细胞克隆孔,先吸 除旧培养液,用Hanks洗1~2次,继加胰蛋白酶少许,加入量已能覆盖细胞群即可,如过 多,应吸除多余消化液。置于倒置显微镜下窥视,待发现细胞变圆时,加入0.1ml含 10%血 清的克隆培养基,用吸管轻轻吹打,当细胞离开底物悬浮后,一并吸入管内,移入另瓶或皿 中,再补加一定量克隆培养液,置CO2温箱中继续培养.增殖.使之形成新的细胞群后, 即转用常规培养法培养。 必须保证分离出来的细胞确为一个而不是两个或更多。因此必须提高克隆形成率才易克隆成功,为此常采取以下一些措施:使用适应性培养基或条件培养基(Conditional Medium)。制备方法: 培养同源细胞(未克隆前时的同一细胞)至半汇合状态时,更换一次培养液,再继续培养 24~48 小时后,吸出所有培养液。 离心:3000~4000/分离心 10 分钟,吸取上清液。滤过:再经直径 0.22μm 滤孔的滤膜过滤,低温冻存贮备用;用时取 1 分适应培养基+2 分培养基混合使用。使用饲细胞(Feeder Cells)。制备方法: 人肺癌细胞 A549细胞传代细胞 取原代培养的人或动物胚胎成纤维细胞,90%汇合时制成细胞悬液,再按 105 细胞/毫升重新接种培养。 在细胞半汇合时,准备 0.25μg/ml 的丝裂霉素 C,按 2μg/106 细胞的量加入到培养瓶中过夜;或用射线单次照射,剂量 30~50 戈瑞。细胞经上述处理后,Hanks 液漂洗两次、更换培养液、再培养 24 小时,胰蛋白酶消化细胞制成悬液,按 5×104(104 细胞/cm2)接种入新培养基中。 48 小时后,即可用于细胞克隆之用。 底物特殊处理: 制备浓度为 1 mg/ml 的多聚右旋赖氨酸的水溶液,用以湿润培养瓶底。倒出多聚赖氨酸溶液,用 5ml PBS 冲洗一次后,可立即使用,或存数周内使用。 细胞详细信息: HEL细胞 :http://www.tongpaiyz。。com/shopdetail/product/20150521-2004897410.html HEK-2细胞:http://www.tongpaiyz。。com/shopdetail/product/20150521-2004897355.html HEC-1-B细胞:http://www.tongpaiyz。。com/shopdetail/product/20150521-2004897328.html HEC-1-A细胞:http://www.tongpaiyz。。com/shopdetail/product/20150521-2004897248.html HCT-8细胞:http://www.tongpaiyz。。com/shopdetail/product/20150521-2004897194.html HCT-15细胞:http://www.tongpaiyz。。com/shopdetail/product/20150521-2004897147.html HCT116细胞:http://www.tongpaiyz。。com/shopdetail/product/20150521-2004897007.html Hce-8693细胞:http://www.tongpaiyz。。com/shopdetail/product/20150521-2004896863.html HCCLM3细胞:http://www.tongpaiyz。。com/shopdetail/product/20150521-2004896764.html HCCC-9810细胞 :http://www.tongpaiyz。。com/shopdetail/product/20150521-2004896667.html HCC-94细胞:http://www.tongpaiyz。。com/shopdetail/product/20150521-2004895187.html
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