细胞:F98细胞 中文名称:大鼠胶质瘤细胞 生长特性:贴壁 培养基:DMEM-L培养基 血清:10%FBS(GIBCO胎牛血清) 冻存条件:50%基础培养基、40% FBS、10% DMSO F98细胞传代: 1):细胞密度约80%时,吸出原培养瓶中的培养基,PBS缓冲液润洗细胞两次,加2~3 ml 0.25% yi酶进行消化细胞(注意根据实际情况,把握消化时间)。 2):镜下观察消化情况,在细胞边缘缩小,贴壁松动时; (可用吸管吸起些许yi酶轻轻吹打细胞层某处,即可肉眼可见细胞层脱落,或吹打后镜下观察吹打处,即消化完成,否则继续消化) 直接吸掉yi酶,加3~4ml 培养基,轻轻吹打细胞层,把细胞层吹落,吹散。 3):取部分细胞悬液转移到新的培养皿中,添加适当的培养基,把细胞悬液打匀,于培养箱中培养。 4):注意培养基PH值变化情况,定期换液(每周2-3次),待细胞密度达到80%以后重复1项操作或者冻存。 (网络信息主针对网络推广作用,仅供参考,细胞培养请咨询细胞库管理员,以细胞库管理员提供给您的信息为准,操作前,如果有不明白之处,先咨询细胞库管理员,避免不必要的损失;) 禽白血病病毒(ALV)核酸扩增检(PCR-荧光探针法 )DNA提取 样品处理: 羽髓、肝脏、脾脏、淋巴结、骨髓及肿瘤等固体组织: 用研磨器充分研磨,取约50mg转至一洁净的1.5ml离心管中。取50μl左右组织匀浆转移到1.5mL的EP管中,加入50μl核酸提取液B(提取液内含不溶物质,使用前室温解冻并充分混匀),充分混匀。100℃处理10分钟,13,000rpm离心3分钟,取上清液4μl做PCR反应。 血清、培养物、体液等液体标本: 取50μl液体标本,加入加50μl核酸提取液B(提取液内含不溶物质,使用前室温解冻并充分混匀),充分混匀。100℃处理10分钟,13,000rpm离心3分钟,取上清液4μl做PCR反应。 阴性质控品: 取50 μl阴性质控品加入50μl核酸提取液B,充分震荡。后100℃裂解10分钟,然后13,000rpm离心3分钟,取上清液4μl做PCR反应。 ALV-阳性质控品: 直接取4μl进行PCR扩增。或按照PCR扩增介绍方法进行定量分析。
|