细胞：T24细胞 中文名称：人膀胱移行细胞癌细胞 生长特性：贴壁 培养基：1640 培养基 血清：10%FBS（GIBCO胎牛血清） 冻存条件：50%基础培养基、40% FBS、10% DMSO 收到细胞后请尽快更换配套培养基，或自己配置的新鲜培养基（含15%血清），如因特殊情况需要继续使用原瓶培养基，请在原瓶培养基中额外添加10%的血清（原瓶培养基的继续使用时间最长不宜超过72小时）。 T24细胞传代： 1）：细胞密度约80%时，吸出原培养瓶中的培养基，PBS缓冲液润洗细胞两次，加2~3 ml 0.25% yi酶进行消化细胞（注意根据实际情况，把握消化时间）。 2）：镜下观察消化情况，在细胞边缘缩小，贴壁松动时； （可用吸管吸起些许yi酶轻轻吹打细胞层某处，即可肉眼可见细胞层脱落，或吹打后镜下观察吹打处，即消化完成，否则继续消化） 直接吸掉yi酶，加3~4ml 培养基，轻轻吹打细胞层，把细胞层吹落，吹散。 3）：取部分细胞悬液转移到新的培养皿中，添加适当的培养基，把细胞悬液打匀，于培养箱中培养。 4）：注意培养基PH值变化情况，定期换液（每周2-3次），待细胞密度达到80%以后重复1项操作或者冻存。 （网络信息主针对网络推广作用，仅供参考，细胞培养请咨询细胞库管理员，以细胞库管理员提供给您的信息为准，操作前，如果有不明白之处，先咨询细胞库管理员，避免不必要的损失；） RNAi在哺乳动物细胞中通常用于阻断特定基因的表达从而研究基因的功能，常见的做法是将靶向特定基因的大约21碱基长短的双链sirnas(small interfering RNAs)，或者是45—50-mer的发夹结构RNA（small hairpin RNA, shRNA）转染到细胞。 （人DU4475细胞 乳上皮细胞）（人EB-3细胞 伯基特淋巴瘤细胞） shRNA在细胞内会自动被加工成为siRNA，从而引发基因沉默或者表达抑制。现在有多个报道说通过质粒表达siRNAs同样可以抑制特定基因的表达。 （人H1HeLa细胞 宫颈细胞）（人HS 683细胞 脑胶质瘤细胞） 尽管细节各有不同，但载体大都是用PolIII启动子启动编码shRNA(small hairpin RNA)的序列。选用PolIII启动子的原因在于这个启动子总是在离启动子一个固定距离的位置开始转录合成RNA，遇到4—5个连续的U即终止，非常精确。 （人J82细胞 膀胱癌细胞）（人Jurkat细胞 白血病细胞） 当这种带有PolIII 启动子和shRNA编码序列的质粒转染哺乳动物细胞时，这种能表达siRNA的质粒确实能够下调特定基因的表达，抑制范围包括外源基因和内源基因。 （人JurkatE6-1细胞 白血病细胞）（人MDA-MB-175Ⅶ细胞 乳导管癌细胞） 采用这种方法的优点在于，通过siRNA表达质粒的选择标记，siRNA载体能够更长时间地抑制目的基因表达。
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