细胞：THLE-2细胞

中文名称：人肝细胞

生长特性：贴壁

培养基：1640 培养基  血清：10%FBS（GIBCO胎牛血清）

冻存条件：50%基础培养基、40% FBS、10% DMSO

收到细胞后请尽快更换配套培养基，或自己配置的新鲜培养基（含15%血清），如因特殊情况需要继续使用原瓶培养基，请在原瓶培养基中额外添加10%的血清（原瓶培养基的继续使用时间最长不宜超过72小时）。

THLE-2细胞传代：

1）：细胞密度约80%时，吸出原培养瓶中的培养基，PBS缓冲液润洗细胞两次，加2~3 ml 0.25% yi酶进行消化细胞（注意根据实际情况，把握消化时间）。

2）：镜下观察消化情况，在细胞边缘缩小，贴壁松动时；

（可用吸管吸起些许yi酶轻轻吹打细胞层某处，即可肉眼可见细胞层脱落，或吹打后镜下观察吹打处，即消化完成，否则继续消化）

直接吸掉yi酶，加3~4ml 培养基，轻轻吹打细胞层，把细胞层吹落，吹散。

3）：取部分细胞悬液转移到新的培养皿中，添加适当的培养基，把细胞悬液打匀，于培养箱中培养。

4）：注意培养基PH值变化情况，定期换液（每周2-3次），待细胞密度达到80%以后重复1项操作或者冻存。

（网络信息主针对网络推广作用，仅供参考，细胞培养请咨询细胞库管理员，以细胞库管理员提供给您的信息为准，操作前，如果有不明白之处，先咨询细胞库管理员，避免不必要的损失；）

由于质粒可以复制扩增，相比起化学合成来说，这就能够显著降低制备siRNA的成本。因为质粒的价钱大约是3000多人民币，还不到化学合成1条21nt的RNA价格的一半，但是就可以自行制备siRNA而不受数量的限制。

（人MDA-MB-415细胞 乳癌细胞）（人MDA-MB-435细胞 乳导管癌细胞）

在这里为大家介绍几种不同的siRNA合成质粒，但是大家要注意的是这里介绍的siRNA质粒是不同于体外转录合成RNA的质粒，因为这里制备的是用于哺乳动物细胞实验的siRNA，而不是长链的RNA（长链的dsRNA不适宜用在哺乳动物细胞;

（人MDA-MB-436细胞 乳癌细胞）（人NCI-H1703细胞肺鳞癌细胞）

因为会引发非特异抑制pSilencer siRNA 表达载体系列是用于在培养的哺乳动物细胞中表达siRNA的一系列载体。

（人NCI-H2170细胞肺鳞癌细胞）（人NCI-H460细胞肺癌细胞）

在载体上包含有RNA聚和酶III （Pol III）启动子，氨苄抗性基因和大肠杆菌复制子，只要将编码一小段对应目的基因特异序列的、其RNA能形成发夹结构（就是回文结构）的DNA序列插入载体中Pol III 启动子的下游，转入哺乳动物细胞，载体就能表达出发夹结构的RNA，这种RNA很快在细胞中加工成为siRNA。

（人NCI-H524细胞肺癌细胞）（人NCI-H661细胞肺癌细胞）

这些表达载体已经成功的在Hela细胞中抑制了包括Cyclophilin、GAPDH、p53、c-myc在内的多个基因的表达。实验表明：能够被化学合成或者体外合成的siRNAs抑制的基因同样可以被表达相同序列的载体生成的siRNAs抑制。

（人NCI-H69细胞肺癌细胞）（人NCI-H716细胞结直肠腺癌细胞）