细胞：801-D细胞 中文名称：人大细胞肺癌细胞 生长特性：贴壁 培养基：1640 培养基 血清：10%FBS（GIBCO胎牛血清） 冻存条件：50%基础培养基、40% FBS、10% DMSO 收到细胞后请尽快更换配套培养基，或自己配置的新鲜培养基（含15%血清），如因特殊情况需要继续使用原瓶培养基，请在原瓶培养基中额外添加10%的血清（原瓶培养基的继续使用时间最长不宜超过72小时）。 801-D细胞传代： 1）：细胞密度约80%时，吸出原培养瓶中的培养基，PBS缓冲液润洗细胞两次，加2~3 ml 0.25% yi酶进行消化细胞（注意根据实际情况，把握消化时间）。 2）：镜下观察消化情况，在细胞边缘缩小，贴壁松动时； （可用吸管吸起些许yi酶轻轻吹打细胞层某处，即可肉眼可见细胞层脱落，或吹打后镜下观察吹打处，即消化完成，否则继续消化） 直接吸掉yi酶，加3~4ml 培养基，轻轻吹打细胞层，把细胞层吹落，吹散。 3）：取部分细胞悬液转移到新的培养皿中，添加适当的培养基，把细胞悬液打匀，于培养箱中培养。 4）：注意培养基PH值变化情况，定期换液（每周2-3次），待细胞密度达到80%以后重复1项操作或者冻存。 （网络信息主针对网络推广作用，仅供参考，细胞培养请咨询细胞库管理员，以细胞库管理员提供给您的信息为准，操作前，如果有不明白之处，先咨询细胞库管理员，避免不必要的损失；） 牛结核杆菌(BTB)核酸检测： 适用仪器：主要包括ABI GeneAmp PCR System7700、ABI GeneAmp PCR System7500、ABI PRISM 7300、LightCycler等毛细管的仪器，MJ Opticon系列或取得资格认证的定量PCR仪。 核酸提取 1.1 外周血淋巴细胞 (用户亦可用淋巴细胞分离液分离淋巴细胞) 1.1.1将抗凝血摇匀，取500μl转至一洁净的1.5ml 离心管中，编号标记。 1.1.2 加入1ml 1×红细胞裂解液(RCLB,试剂盒配备10×RCLB，使用前请用双蒸馏水按1：9比例配制成1×RCLB)，剧烈震荡30s，3000g离心5min，弃上清。 1.1.3 重复 1.1.2 两次至无明显红色沉淀。(若沉淀明显，请再重复步骤1.1.2 一次)。 1.1.4 加入1ml生理盐水，剧烈震荡15s，10000g离心5min，弃上清。 1.1.5 沉淀加50μl核酸提取液B(使用前请室温溶解并充分混匀), 充分混匀。 1.2 痰液：将痰液充分混匀，取0.5ml转至1.5ml干净离心管，加入1ml 4%NaOH，充分混匀，室温放置10min，13,000rpm离心5分钟，弃上清，沉淀加50μl核酸提取液B，充分混匀。 1.3 肺脏、淋巴结等固体组织：取约200mg组织，加入500μl生理盐水，研磨成组织匀浆，取50μl转至一洁净的1.5ml 的离心管中，加50μl核酸提取液B，充分混匀。 1.4 疑似动物乳液：取1ml乳液，转至一洁净的1.5ml 的离心管中，13,000rpm离心3分钟，弃上清，沉淀加50μl核酸提取液B，充分混匀。 以上处理标本最后100℃处理10分钟，13,000rpm离心5分钟，取上清液3μl做PCR反应。 阴性质控品：取50μl阴性质控品，加50μl核酸提取液B充分混匀(提取液用前需室温溶解并充分混匀)后100℃10分钟，13,000rpm离心3分钟，取上清液4μl做PCR反应。 BTB-阳性质控品：直接取4μl进行PCR扩增，或按照PCR扩增介绍方法进行定量分析。
|
