细胞：TE-10细胞

中文名称：人食管癌细胞

生长特性：贴壁

培养基：1640 培养基  血清：10%FBS（GIBCO胎牛血清）

冻存条件：50%基础培养基、40% FBS、10% DMSO

收到细胞后请尽快更换配套培养基，或自己配置的新鲜培养基（含15%血清），如因特殊情况需要继续使用原瓶培养基，请在原瓶培养基中额外添加10%的血清（原瓶培养基的继续使用时间最长不宜超过72小时）。

TE-10细胞传代：

1）：细胞密度约80%时，吸出原培养瓶中的培养基，PBS缓冲液润洗细胞两次，加2~3 ml 0.25% yi酶进行消化细胞（注意根据实际情况，把握消化时间）。

2）：镜下观察消化情况，在细胞边缘缩小，贴壁松动时；

（可用吸管吸起些许yi酶轻轻吹打细胞层某处，即可肉眼可见细胞层脱落，或吹打后镜下观察吹打处，即消化完成，否则继续消化）

直接吸掉yi酶，加3~4ml 培养基，轻轻吹打细胞层，把细胞层吹落，吹散。

3）：取部分细胞悬液转移到新的培养皿中，添加适当的培养基，把细胞悬液打匀，于培养箱中培养。

4）：注意培养基PH值变化情况，定期换液（每周2-3次），待细胞密度达到80%以后重复1项操作或者冻存。

（网络信息主针对网络推广作用，仅供参考，细胞培养请咨询细胞库管理员，以细胞库管理员提供给您的信息为准，操作前，如果有不明白之处，先咨询细胞库管理员，避免不必要的损失；）

犬瘟热病毒(CDV)核酸扩增检测

实验目的：本试剂盒适用于检测疑似动物(犬) 分泌物、排泄物(鼻汁、唾液、泪液、心包液、胸 水、腹水及尿液)以及血液、脑脊髓液、淋巴结、肝、脾、脊髓等脏器组织犬瘟热病毒(CDV)mRNA，适用于犬瘟热病毒(CDV)感染的辅助诊断及流行病学调查。其检测结果仅供参考。

实验原理：本试剂盒选取一对犬瘟热病毒(CDV) 特异性引物和一条特异性荧光探针，采用Trizol提取犬瘟热病毒(CDV)RNA，经过逆转录作用生成cDNA，后者在耐热DNA聚合酶（Taq酶）作用下，配以FQ-Buffer(内含Mg2+、Tris-HCl等)、四种核苷酸单体（dNTPs）等成分，通过PCR-荧光探针法对犬瘟热病毒(CDV)RNA进行扩增，从而达到实时快速检测之目的。

实验组成：

（RNA提取液B 1管 500μl/管） （CDV-RT MIX 2管 140μl/管）（逆转录酶系 1管 40μl/管 ）

（Taq酶系 1管 80μl/管 ）（CDV-PCRMIX 1管 960μl/管）（CDV 阳性质控品 1管 50μl/管(107Copies/ml)）

（阴性质控品 1管 500μl/管）（DEPC水 1管 2000μl/管）

备注: RNA提取液A（Trizol reagents）等另行配备。

犬瘟热病毒(CDV)核酸检测质控标准：

阴性质控品：全部阴性。没有曲线增长。

CDV-阳性质控品：阳性质控品的 Ct 值均应小于 35.0。

∣r∣≥0.97（correlation数值介于-0.97~-1之间，correlation数值等同于∣r∣值）。

 以上条件应同时满足 ，否则，此次试验视为无效，全部试验应重新进行。

犬瘟热病毒(CDV)核酸检测结果判定：

测定结果的计算：

如果Ct值﹤38，则实验样品的CDV RNA含量(基因拷贝数/ml)= Qty-Copies/ml。

如果38﹤Ct值﹤40,为灰区建议重新检测，重新检测若38﹤Ct值﹤40判为阳性，否则为阴性。

如果Ct值=40，则CDV RNA含量（基因拷贝数/ml）﹤1×102Copies/ml (低于检测下限)。