细胞：G422细胞 中文名称：小鼠神经胶质瘤细胞 生长特性：贴壁 培养基：1640 培养基 血清：10%FBS（GIBCO胎牛血清） 冻存条件：50%基础培养基、40% FBS、10% DMSO 收到细胞后请尽快更换配套培养基，或自己配置的新鲜培养基（含15%血清），如因特殊情况需要继续使用原瓶培养基，请在原瓶培养基中额外添加10%的血清（原瓶培养基的继续使用时间最长不宜超过72小时）。 G422细胞传代： 1）：细胞密度约80%时，吸出原培养瓶中的培养基，PBS缓冲液润洗细胞两次，加2~3 ml 0.25% yi酶进行消化细胞（注意根据实际情况，把握消化时间）。 2）：镜下观察消化情况，在细胞边缘缩小，贴壁松动时； （可用吸管吸起些许yi酶轻轻吹打细胞层某处，即可肉眼可见细胞层脱落，或吹打后镜下观察吹打处，即消化完成，否则继续消化） 直接吸掉yi酶，加3~4ml 培养基，轻轻吹打细胞层，把细胞层吹落，吹散。 3）：取部分细胞悬液转移到新的培养皿中，添加适当的培养基，把细胞悬液打匀，于培养箱中培养。 4）：注意培养基PH值变化情况，定期换液（每周2-3次），待细胞密度达到80%以后重复1项操作或者冻存。 （网络信息主针对网络推广作用，仅供参考，细胞培养请咨询细胞库管理员，以细胞库管理员提供给您的信息为准，操作前，如果有不明白之处，先咨询细胞库管理员，避免不必要的损失；） 犬细小病毒(CPV) DNA提取： 1）：血清或病毒液：取液体标本约50μl，转至1.5ml洁净离心管中，加50μl核酸提取液B(DNA) 充分混匀(提取液用前需室温溶解并充分混匀)后100℃10分钟，13,000rpm离心3分钟，取上清液4μl做PCR反应。 2）：心、肠、淋巴结等固体组织：取组织标本约500mg，加入1ml生理盐水，研磨器研磨成匀浆，取50μl匀浆液加50μl核酸提取液B(DNA) 充分混匀（提取液用前需室温溶解并充分混匀）后100℃10分钟，13,000rpm离心3分钟，取上清液4μl做PCR反应。 3）：粪便或者呕吐物：充分混匀上述标本，3,000rpm离心1min，取上清液500μl转至一1.5ml洁净的离心管中，加500μl病毒浓缩液，充分混匀，13000 rpm离心3min，弃上清，沉淀加50μl核酸提取液B(DNA) 充分混匀（提取液用前需室温溶解并充分混匀）后100℃10分钟，13,000rpm离心3分钟，取上清液4μl做PCR反应。 阴性质控品：取50 μl阴性质控品加入50μl核酸提取液B，充分震荡。后100℃裂解10分钟，然后13,000rpm离心3分钟，取上清液4μl做PCR反应。 CPV阳性质控品：直接取4μl进行PCR扩增。或按照PCR扩增介绍方法进行定量分析。 【结果判定】 测定结果的计算： 如果Ct值﹤38，则实验样品的CPV DNA含量(基因拷贝数/ml)= Qty-Copies/ml； 如果38﹤Ct值﹤40，为灰区建议重新检测，重新检测若38﹤Ct值﹤40判为阳性，否则为阴性。 如果Ct值=40，则CPV DNA含量（基因拷贝数/ml）﹤1×10P2PCopies/ml (低于检测下限)。
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