细胞:EOMA细胞 中文名称:小鼠血管瘤细胞 生长特性:贴壁 培养基:1640 培养基 血清:10%FBS(GIBCO胎牛血清) 冻存条件:50%基础培养基、40% FBS、10% DMSO 收到细胞后请尽快更换配套培养基,或自己配置的新鲜培养基(含15%血清),如因特殊情况需要继续使用原瓶培养基,请在原瓶培养基中额外添加10%的血清(原瓶培养基的继续使用时间最长不宜超过72小时)。 EOMA细胞传代: 1):细胞密度约80%时,吸出原培养瓶中的培养基,PBS缓冲液润洗细胞两次,加2~3 ml 0.25% yi酶进行消化细胞(注意根据实际情况,把握消化时间)。 2):镜下观察消化情况,在细胞边缘缩小,贴壁松动时; (可用吸管吸起些许yi酶轻轻吹打细胞层某处,即可肉眼可见细胞层脱落,或吹打后镜下观察吹打处,即消化完成,否则继续消化) 直接吸掉yi酶,加3~4ml 培养基,轻轻吹打细胞层,把细胞层吹落,吹散。 3):取部分细胞悬液转移到新的培养皿中,添加适当的培养基,把细胞悬液打匀,于培养箱中培养。 4):注意培养基PH值变化情况,定期换液(每周2-3次),待细胞密度达到80%以后重复1项操作或者冻存。 (网络信息主针对网络推广作用,仅供参考,细胞培养请咨询细胞库管理员,以细胞库管理员提供给您的信息为准,操作前,如果有不明白之处,先咨询细胞库管理员,避免不必要的损失;) 犬细小病毒(CPV)标本采集: 适用标本类型:狗、貉、狐狗、貉等动物唾液、呕吐物、粪便、血清或病毒液或者病死动物心、肠等实质脏器标本。 标本采集: 固体组织:无菌条件下取病死动物肠、心或淋巴结或其他组织等100mg左右,置入1.5ml洁净EP管,立即送检。 血清:用一次性无菌注射器抽取受检动物静脉血2-5ml,静置斜放待血清析出, 1,0000rpm离心3分钟,可取上清立即用于测试;或吸取上部血清(约200µl)转入无菌1.5ml Eppendoff管,保存待检。 粪便或呕吐物:无菌条件下取发病动物粪便或呕吐物等1g左右,置入含有1ml生理盐水的5ml洁净离心管中,立即送检。 实验仪器:主要包括ABI GeneAmp PCR System7700、ABI GeneAmp PCR System7500、ABI PRISM 7300、LightCycler等毛细管的仪器,MJ Opticon系列或取得资格认证的定量PCR仪。 【结果判定】 测定结果的计算: 如果Ct值﹤38,则实验样品的CPV DNA含量(基因拷贝数/ml)= Qty-Copies/ml; 如果38﹤Ct值﹤40,为灰区建议重新检测,重新检测若38﹤Ct值﹤40判为阳性,否则为阴性。 如果Ct值=40,则CPV DNA含量(基因拷贝数/ml)﹤1×10P2PCopies/ml (低于检测下限)。
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