人胚肺成纤维细胞MRC-5细胞 冻存与复苏 为了防止因污染或技术原因使长期培养功亏一篑,考虑到培养细胞因传代而迟早会出现变异,有时因寄赠、交换和购买,培养细胞从一个实验室转运到另一个实验室,*的策略是进行低温保存。这对于维持一些特殊细胞株的遗传特性极为重要。现简要介绍深低温保存法(-70℃~-196℃)的特点。细胞深低温保存的基本原理是:在-70℃以下时,细胞内的酶活性均己停止,即代谢处于*停止状态,故可以长期保存。细胞低温保存的关键,在于通过0~20℃阶段的处理过程。在此温度范围内,水晶呈针状,极易招致细胞的严重损伤。 一、细胞的冻存:为避免污染造成的损失,zui小化连续细胞系的遗传改变和避免有限细胞系的老化和转化,需要冻存哺乳细胞。冻存细胞前,细胞应该特性化并检查是否污染。 有几种普通培养基用来冻存细胞。对于包含有血清的培养基,成分可能如下:
人胚肺成纤维细胞MRC-5细胞 冻存与复苏
人胚肺成纤维细胞MRC-5 人胚肺成纤维细胞CCC-HPF-1 人胚胎气管组织来源细胞CCC-HBE-2 人胚胎肺成纤维细胞WI-38 SV-40Z转化肺成纤维细胞WI38/VA13 人胚肺二倍体细胞2BS 人胚肺二倍体细胞KMB-17 人肺细胞HLF-a 人小细胞肺癌细胞DMS 153 人胚肺细胞 VA13细胞WI-38 VA13亚系 2RA 人胚肺二倍体细胞HEL-1 人胚肺细胞系KuMA 人肺转化细胞系AE1201 人肺鳞癌细胞NCI-H226 人胚肺二倍体细胞HEL-2 人支气管上皮样细胞BEAS-2B 人胚肺转化细胞SL-1 人肺腺癌细胞Calu-3 人小细胞肺癌细胞NCI-H209 人低分化肺腺癌细胞GLC-82 人小细胞肺癌细胞NCI-H446 人非小细胞肺腺癌细胞NCI-H157 人肺鳞癌细胞NCI-H520
人胚肺成纤维细胞MRC-5细胞 冻存与复苏 人肺巨细胞癌高转移细胞株PG-BE1 人肺巨细胞癌低转移细胞株PG-LH7 人肺癌细胞A-427 人低分化肺腺癌细胞SK-LU-1 人肺支气管癌细胞NCI-H1650 人非小细胞肺腺癌细胞NCI-H1975 人非小细胞肺腺癌细胞NCI-H2087 人小细胞肺癌细胞NCI-H2227 人非小细胞肺癌细胞NCI-H23 人肺腺鳞癌细胞NCI-H596 ◆包含10%甘油的*培养基, ◆包含10%二甲基亚砜(DMSO)的*培养基, ◆50% 细胞条件培养基和50%含有10%甘油的新鲜培养基,或 ◆50% 细胞条件培养基和50%含有10%二甲基亚砜的新鲜培养基。 对于无血清培养基,一些普通的培养基成分可能是: ◆50% 细胞条件无血清培养基和50%包含有7.5%二甲基亚砜的新鲜的无血清培养基,或 ◆包含有7.5%二甲基亚砜和10%细胞培养级BSA的新鲜无血清培养基。 1.悬浮细胞 ●计数将要冻存的活细胞。细胞应该处于对数生长期。以大约200~400g离心5分钟沉淀细胞,使用移液管移去上清到zui小体积,不要搅乱细胞。 ●以1×107到5×107细胞/ml密度,在包含有血清的冷冻培养基中再次悬浮细胞,或者以0.5×107到1×107在无血清培养基中,再次悬浮细胞。 ●分装进冻存管,将冻存管置于湿冰上或放入4℃冰箱中,5分钟内开始冷冻步骤。 ●细胞以1℃/分钟进行冷冻,可以通过可编程序的冷冻器进行或者把隔离盒中的冻存管放到-70℃到-90℃的冰箱中,然后转移到液氮中贮存。 2.贴壁细胞 ●使用分离试剂从基层分离细胞,分离时尽可能温和,使对细胞的损伤减少到zui小。 ●在*生长培养基中,再次悬浮分离细胞,确定有活力细胞数。 ●以大约200g离心5分钟沉淀细胞。使用移液管移去上清到zui小体积,不要搅乱细胞。 ●以5×106到1×106细胞/ml密度,在冻存液中悬浮细胞。 ●分装进冻存管,将冻存管置于湿的冰上或放入4℃冰箱中,5分钟内开始冷冻步骤。 ●细胞以1℃/分钟进行冷冻,可以通过可编程序的冷冻器进行或者把隔离盒中的冻存管放到-70℃到-90℃的冰箱中,然后转移到液氮中贮存。 |