MRC-5细胞   人胚肺细胞 细胞鉴定说明

 观察家禽巴氏杆菌病的临诊表现和病理解剖变化
   掌握禽巴氏杆菌病的微生物学诊断方法

2．实验内容或原理
根据典型症状和病变，以及在显微镜下检查组织涂片发现的两极染色的杆菌，可初步诊断本病。但确诊应依靠病原分离鉴定，病原分离鉴定原理为革兰氏染色法。

3．需用的仪器或试剂等
动物：鸡、小白鼠
器材：外科镊子、外科剪、灭菌纱布、载玻片、糖发酵管等。
药品：草酸铵结晶紫、革兰氏碘、碳酸复红、瑞特氏染液、美蓝染液、棉拭子、接种环、葡萄糖、蔗糖、果糖、半乳糖、甘露醇、鼠李糖、戊醛糖、纤维二糖、绵子糖、菊糖、赤藓糖、戊五醇、M—肌醇、水杨苷。胰蛋白酶、L-胱胺酸、琼脂粉、酚红。

MRC-5细胞   人胚肺细胞 细胞鉴定说明

4．实验步骤

一、临床症状和病理变化

⒈ 症状
   急性症状:描述
   慢性症状:描述

   病理变化:描述

二 、微生物学诊断

JEG-3    人绒毛膜癌细胞
JeKo-1    人套细胞淋巴瘤细胞
Jurkat, Clone E6-1    人T淋巴细胞白血病细胞
K-562    人慢性髓原白血病细胞
K7M2 wt [K7M2-WT]    小鼠骨肉瘤成骨细胞
Kasumi-1    人红白血病细胞
KB    人口腔表皮样癌细胞
KP-N-NS    人肾上腺神经母细胞瘤细胞(脑转移)
KU812    人外周血嗜碱性白血病细胞
L Wnt-3A    小鼠皮下结缔组织细胞
L1210    小鼠白血病细胞
L5178Y TK+/- clone (3.7.2C)    小鼠淋巴瘤细胞
MRC-5细胞   人胚肺细胞 细胞鉴定说明

L6    大鼠成肌细胞
L6565    小鼠白血病克隆细胞系
Lec1    仓鼠卵巢细胞
Li-7    人肝癌细胞
LLC    小鼠肺癌细胞
LLC-MK2    恒河猴肾细胞
LNCaP clone FGC    人前列腺癌细胞
LoVo    人结肠癌细胞
LS 174T    人结肠腺癌细胞
LTEP-a-2    人肺腺癌细胞
M-20     人胚胎成纤维细胞
M-22     人胚胎成纤维细胞
M-7     人胚胎成纤维细胞
MC3T3-E1 Subclone 14    小鼠颅顶前骨细胞亚克隆14
MCF7 [MCF-7]    人乳腺癌细胞
MDA-MB-231    人乳腺癌细胞
MDA-MB-415    人乳腺腺癌细胞
MDA-MB-435S    人乳腺导管癌
MDA-MB-436    人乳腺腺癌细胞
MDA-MB-453    人乳腺癌细胞
MDA-MB-468    人乳腺癌细胞
MDBK (NBL-1)    牛肾细胞
MDCK(NBL-2)    狗肾细胞
ME-180    人子宫颈表皮癌细胞
MEG-01     人成巨核细胞白血病细胞
MFC    小鼠胃癌细胞
MG-63    人骨肉瘤细胞
MGC80-3    人胃癌细胞
MLTC-1    小鼠睾丸间质细胞瘤细胞
MNNG/HOS Cl #5 [R-1059-D]    人骨肉瘤细胞
MOLT-4    人急性淋巴母细胞白血病细胞
Mo-MuLV/3T3     小鼠Mo-MuLv感染的3T3细胞
MR1 [derivative of HB-11048]    中国仓鼠X小鼠B淋巴细胞杂交瘤
MRC-5    人胚肺细胞
MS1    小鼠胰岛内皮细胞
MS751    人子宫颈表皮癌细胞
MSTO-211H    人肺癌细胞株
Mv.1.Lu(NBL-7)    貂肺上皮细胞
NAMALWA    人Burkitt's淋巴瘤细胞
NCI-H1299    人非小细胞肺癌细胞
NCI-H1395    人肺腺癌细胞
NCI-H1650    人非小细胞肺癌细胞
NCI-H1688      人经典小细胞肺癌细胞
NCI-H1975    人肺腺癌细胞
 
NCI-H292    人肺癌细胞(淋巴结转移)
NCI-H358    人非小细胞肺癌细胞
NCI-H446 [H446]      人小细胞肺癌细胞
NCI-H460 [H460]    人大细胞肺癌细胞
NCI-H661    人大细胞肺癌细胞
NCI-H716 [H716]    人结直肠腺癌细胞

 抹片的制备
    用镊子夹持病变组织肝或脾，然后以灭菌剪刀剪取小块，夹出后将其新鲜切面在载玻片上压印或涂抹成薄层；若取血液，用灭菌剪刀剪开心脏进行蘸取或剪取凝血块，用新鲜切面在载玻片上压印或涂抹成薄层。自然干燥。将干燥好的抹片，涂抹面向上，以其背面在酒精火焰上来回通过数次，略作加热进行固定。

 革兰氏染色法
    固定好的抹片上滴加草酸铵结晶紫色液，染色2min→水洗+加革兰氏碘溶液于抹片上媒染2min→水洗→加95％酒精于抹片上脱色1min→水洗→加稀释碳酸复红复染30s→水洗→吸干→镜检。巴氏杆菌为革兰氏阴性球杆菌或短杆菌，单个或成对存在，常有荚膜。
   其他染色法
   甲醇固定，瑞特氏或美蓝染色呈两极浓染的菌体。
   病原分离
（1）病料的采集：zui急性和急性病例可采集死亡禽只的肝、脾、心血；慢性病例一般采集局部病灶组织；对不新鲜或已被污染的样品，可自骨髓中采取病料。采病料时用烧红的刀片烧烙组织，而后用灭菌棉拭子或接种环通过烧烙表面插入组织或心血内取样。如果为活禽，可通过鼻孔挤出粘液，或将棉拭子插入鼻裂中取样。
（2）培养基制备：马丁琼脂培养基（本实验中采用该培养基）、5％鸡血清葡萄糖淀粉琼脂、鲜血琼脂培养基。
（3）动物接种：如果病料污染严重，则可将0.2mL碾碎的病料，经皮下或腹腔内接种家兔、小鼠或易感鸡，接种动物在24h～48h内死亡，可以从肝脏、心血中分离到巴氏杆菌。
（4）培养：将病料接种于马丁琼脂培养基在35℃～37℃下培养，经18h～24h培养后菌落直径为1mm～3mm，菌落呈散在、圆形，表面凸起呈奶滴状。