巨噬细胞属免疫细胞,有多种功能,是研究细胞吞噬、细胞免疫和分子免疫学的重要对象。巨噬细胞容易获得,便于培养,并可进行纯化。巨噬细胞属不繁殖细胞群,在条件适宜下可生活2-3周,多用做原代培养,难以长期生存。 巨噬细胞也建有无限细胞系大多来自小鼠如P331、S774A.1、RAW309Cr.1等,均获恶性,培养中呈巨噬细胞形态和吞噬功能,易于传代和瓶壁分离,但难以建株。 培养巨噬细胞可用各样方法和各种来源来获取细胞,以小鼠腹腔取材法zui为实用: 1、实验前三天,向小鼠腹腔内注入无菌硫乙酸肉汤1ml(勿注入肠内),以刺流产生大量的巨噬细胞。
2、引颈处死小鼠。
3、手提鼠尾将其全浸入70%乙醇中3-5秒。
4、置动物于解剖台,用针头固定四肢,持镊撕开腹部皮肤,但勿伤及腹膜壁,把皮肤拉向上下两侧,暴露出腹膜壁。
5、用70%究竟擦洗腹膜壁,注射器吸10mlEAGLE液注入腹腔中,同时用手指从两侧压揉腹膜壁,是液体在腹腔内流动。
6、用针头轻挑起腹膜壁并微侵向一侧,使腹腔中液体集中于针头下吸取入针管内。
7、小心拔出针头,把液体注入离心管。
8、4摄氏度下250g离心10分钟后,去上清,加10ml培养基。
9、计数细胞。每只鼠可产生20-30*106细胞,其中90%为巨噬细胞。
10、以3*10的五次方个贴附细胞/平方厘米接种。
11、接种数小时后,出去培养液,可去除其他白细胞,纯化培养细胞,用Ealge液冲洗1-2次,再加新Eagle培养液置CO2温箱中。
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