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NR8383巨噬细胞培养方法实用篇
点击次数:1989 更新时间:2014-04-17

巨噬细胞属免疫细胞,有多种功能,是研究细胞吞噬、细胞免疫和分子免疫学的重要对象。巨噬细胞容易获得,便于培养,并可进行纯化。巨噬细胞属不繁殖细胞群,在条件适宜下可生活2-3周,多用做原代培养,难以长期生存。
巨噬细胞也建有无限细胞系大多来自小鼠如P331、S774A.1、RAW309Cr.1等,均获恶性,培养中呈巨噬细胞形态和吞噬功能,易于传代和瓶壁分离,但难以建株。


培养巨噬细胞可用各样方法和各种来源来获取细胞,以小鼠腹腔取材法zui为实用:
1、实验前三天,向小鼠腹腔内注入无菌硫乙酸肉汤1ml(勿注入肠内),以刺流产生大量的巨噬细胞。


2、引颈处死小鼠。


3、手提鼠尾将其全浸入70%乙醇中3-5秒。


4、置动物于解剖台,用针头固定四肢,持镊撕开腹部皮肤,但勿伤及腹膜壁,把皮肤拉向上下两侧,暴露出腹膜壁。


5、用70%究竟擦洗腹膜壁,注射器吸10mlEAGLE液注入腹腔中,同时用手指从两侧压揉腹膜壁,是液体在腹腔内流动。


6、用针头轻挑起腹膜壁并微侵向一侧,使腹腔中液体集中于针头下吸取入针管内。


7、小心拔出针头,把液体注入离心管。


8、4摄氏度下250g离心10分钟后,去上清,加10ml培养基。


9、计数细胞。每只鼠可产生20-30*106细胞,其中90%为巨噬细胞。


10、以3*10的五次方个贴附细胞/平方厘米接种。


11、接种数小时后,出去培养液,可去除其他白细胞,纯化培养细胞,用Ealge液冲洗1-2次,再加新Eagle培养液置CO2温箱中。

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小鼠肺癌细胞,LLC 小鼠肺成纤维细胞,MML  小鼠肝癌细胞,Hepa 1-6 
小鼠胃癌细胞,MFC 
小鼠前胃癌细胞,MFC 
小鼠前胃癌细胞(绿色荧光蛋白标记),MFC-GFP 
小鼠肝上皮细胞,BNL 1ME A.7R.1 
小鼠结肠癌细胞,CT26.WT 
小鼠正常肝细胞,NCTC 1469  小鼠胚胎肝细胞,BNL CL.2 
小鼠肝癌细胞,H22  ? 小鼠肾集合管细胞(含 SV40病毒序列),M-1 
小鼠肾足细胞(含 tsSV40T序列),Mouse podocyte 
鼠肾上腺皮质细胞,Y1 
鼠前列腺癌细胞,RM-1 ? 小鼠树突状细胞肉瘤细胞,DCS 
小鼠小脑组织细胞,C8-D1A 
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长双歧杆菌 ATCC15707
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师岗链霉菌 ATCC19166
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丝状链霉菌 ATCC19753
裂殖壶菌 ATCC20888
产朊假丝酵母 ATCC22023
乙酸钙不动杆菌 ATCC23055
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菲律宾链霉菌 ATCC23905
里氏木霉 ATCC24449
变异链球菌 ATCC25175
沙链霉菌 ATCC25488
酪丁酸梭菌 ATCC25755
蛎灰链霉菌 ATCC27455
黄曲霉 ATCC28539
噬糖盐红菌 ATCC29252
隐甲藻 ATCC30772
干酪乳杆菌干酪亚种 ATCC334
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马克斯克鲁维酵母 ATCC36534
串珠镰孢 ATCC38946
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潮湿纤维单胞菌 ATCC491
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串珠镰孢 ATCC52539
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痤疮丙酸杆菌 ATCC6919
鼠李糖乳杆菌 ATCC7469
食油假单胞菌 ATCC8062
粘质沙雷氏菌 ATCC8100
蛾微杆菌 ATCC8365
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空肠弯曲杆菌 ATCC 33291
产气肠杆菌 ATCC13048
金黄色葡萄球菌 ATCC 27217
阴沟肠杆菌 ATCC 13047
阪崎肠杆菌 ATCC 29544
弗氏柠檬酸杆菌 ATCC 43864
肺炎克雷伯氏菌 ATCC 10031
小肠结肠炎耶尔森氏菌 ATCC 23715
热带念珠菌 ATCC 13803
克柔假丝酵母菌 ATCC 14243
光滑念珠菌 ATCC 15126
创伤弧菌 ATCC 27562

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