菌种保藏法

更新时间：2015-07-07

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保藏:立即将预冻后的冷冻管转移至处于液氮中的储存器中，置于液态氮的气相或液相保藏。一般气相中温度为－150℃，液相中温度为－196℃。用此法可保藏酵母菌5～8年。

ATCC细胞,传代细胞,菌种

恢复培养:将冷冻管立即放置38～40℃水浴中复苏并适当快速摇动，直到内部结冰全部溶解为止，整个复苏过程约需50～100秒。
用75%酒精棉擦拭冷冻管。将冷冻管盖子旋开，无菌条件下将内容物转移至麦芽汁或其它适宜培养基上，28～30℃或适温下培养。

注意事项:
操作时要注意安全，带防护面罩和手套，防止冻伤。
冷冻管于液相中存放时一定要拧紧螺帽。
运送液氮时要用特制的容器，绝不可用密闭容器存放或运输液氮，切勿使用保温瓶存放液氮。
注意存放液氮容器的室内通风，防止过量氮气使人窒息。
防止冷冻管破裂爆炸，如液氮渗入管内，当从液氮容器取出时，液态氮体积膨胀约680
倍，爆炸力很大，要特别小心。
注意观察液氮容器中液氮的残存量，定期补充液氮。

菌种保藏法 液氮超低温冻结法

安瓿管或冷冻管的准备:
将1.8mL冷冻管洗净，晾干.激光打印标签，标签上标明菌株编号和保藏日期，大小约为10×20mm，标签在管内的位置应距离管底约10mm左右，标签上有字的一面面向管壁。也可直接将菌株编号和保藏日期直接喷码在冷冻管表面。塞好棉塞或旋上盖子，121℃蒸汽灭菌15～20分钟，60℃烘干备用。

菌种保藏法 保护剂的准备:选用分析纯甘油制备保护剂。用蒸馏水配制10%的甘油溶液作为保护剂，每支试管分装5mL，121℃蒸汽灭菌15～20分钟。

保藏培养物的准备:斜面培养物的制备，要求培养至静止期或成熟期。无菌条件下将灭过菌的10%甘油5mL用无菌吸管注入到培养好的斜面中，用吸管刮取斜面上的菌体，注意不要将培养基刮破。将菌体与保护剂混匀后用吸管注入到冷冻管内，每支分装约1mL，菌悬液中细胞浓度应不低于106个/mL。将冷冻管盖子旋紧后放入冻结器内。

预冻:可采用以下两种方式进行预冻：将控温系统先预冷到4℃，再将盛有保藏物的冷冻管放入其中，以每分钟1℃的降温速率使温度降至－35℃。将冷冻管置－20℃至－40℃冰箱中冷冻，1～2小时取出放入液氮罐中快速冷冻，这样冷冻速率大约每分钟下降1～1.5℃。

菌种 保藏法

菌种保藏法