菌种 保藏法 : : :tongpaibio 保藏:立即将预冻后的冷冻管转移至处于液氮中的储存器中,置于液态氮的气相或液相保藏。一般气相中温度为-150℃,液相中温度为-196℃。用此法可保藏酵母菌5~8年。 ATCC细胞,传代细胞,菌种
恢复培养:将冷冻管立即放置38~40℃水浴中复苏并适当快速摇动,直到内部结冰全部溶解为止,整个复苏过程约需50~100秒。 用75%酒精棉擦拭冷冻管。将冷冻管盖子旋开,无菌条件下将内容物转移至麦芽汁或其它适宜培养基上,28~30℃或适温下培养。 注意事项: 操作时要注意安全,带防护面罩和手套,防止冻伤。 冷冻管于液相中存放时一定要拧紧螺帽。 运送液氮时要用特制的容器,绝不可用密闭容器存放或运输液氮,切勿使用保温瓶存放液氮。 注意存放液氮容器的室内通风,防止过量氮气使人窒息。 防止冷冻管破裂爆炸,如液氮渗入管内,当从液氮容器取出时,液态氮体积膨胀约680 倍,爆炸力很大,要特别小心。 注意观察液氮容器中液氮的残存量,定期补充液氮。 菌种 保藏法 液氮超低温冻结法 安瓿管或冷冻管的准备: 将1.8mL冷冻管洗净,晾干.激光打印标签,标签上标明菌株编号和保藏日期,大小约为10×20mm,标签在管内的位置应距离管底约10mm左右,标签上有字的一面面向管壁。也可直接将菌株编号和保藏日期直接喷码在冷冻管表面。塞好棉塞或旋上盖子,121℃蒸汽灭菌15~20分钟,60℃烘干备用。 菌种 保藏法 保护剂的准备:选用分析纯甘油制备保护剂。用蒸馏水配制10%的甘油溶液作为保护剂, 每支试管分装5mL,121℃蒸汽灭菌15~20分钟。 保藏培养物的准备:斜面培养物的制备,要求培养至静止期或成熟期。无菌条件下将灭过菌的10%甘油5mL用无菌吸管注入到培养好的斜面中,用吸管刮取斜面上的菌体,注意不要将培养基刮破。将菌体与保护剂混匀后用吸管注入到冷冻管内,每支分装约1mL,菌悬液中细胞浓度应不低于106个/mL。将冷冻管盖子旋紧后放入冻结器内。 预冻:可采用以下两种方式进行预冻:将控温系统先预冷到4℃,再将盛有保藏物的冷冻管放入其中,以每分钟1℃的降温速率使温度降至-35℃。将冷冻管置-20℃至-40℃冰箱中冷冻,1~2小时取出放入液氮罐中快速冷冻,这样冷冻速率大约每分钟下降1~1.5℃。 |