细胞株的冻存、复苏 为了防止因污染或技术原因使长期培养功亏一篑，考虑到培养细胞因传代而迟早会出现变异，有时因寄赠、交换和购买，培养细胞从一个实验室转运到另一个实验室，*的策略是进行低温保存。这对于维持一些特殊细胞株的遗传特性极为重要。现简要介绍深低温保存法（-70℃~-196℃）的特点。细胞深低温保存的基本原理是：在-70℃以下时，细胞内的酶活性均己停止，即代谢处于*停止状态，故可以长期保存。细胞低温保存的关键，在于通过0~20℃阶段的处理过程。在此温度范围内，水晶呈针状，极易招致细胞的严重损伤。 细胞株的冻存、复苏 传代细胞可提供复苏，冻存细胞，ATCC细胞。具体可根据科研人员要求决定。代做各种细胞服务。 对于贴壁细胞应先吸（倒）尽培养基，吸的越干净越好，以免中和后加入的消化液，使强度减弱（或PBS洗1－3次）。50ml培养瓶加入消化液约1-3ml，按此比例进行消化，晃动使消化液铺均匀置37度培养箱约2-5分钟，镜下见细胞收缩变圆或少数脱落后，轻轻振动瓶底使细胞全部脱落，加入2-3ml*培养基后，轻轻吹打，使细胞基本成单个悬浮，然后分置其它无菌培养瓶内，加入*培养基后继续培养或实验。 一般传代可直接将细胞原液分置其它培养瓶内，加入*培养基继续培养，如要高浓度可先离心1000rpm，5min后加入*培养基，轻轻吹匀后，分置其它培养瓶内加入*培养基继续培养。具体情况根据说明书操作，或致电本公司技术人员。 细胞株的冻存、复苏 A549 [A-549]细胞人肺癌细胞 CHO/dhFr-细胞中国仓鼠卵巢细胞（二氢叶酸还原型缺陷型） CHO-K1细胞中国仓鼠卵巢细胞K1（亚系克隆） Cyc-Tag（S49）细胞小鼠T淋巴瘤细胞 DU 145 [DU145；DU-145]人前列腺癌细胞 FDC-P1细胞小鼠骨髓细胞 GH3细胞大鼠垂体瘤细胞 GT1-1细胞小鼠垂体瘤细胞 293 [HEK-293；HEK293]细胞人胚肾细胞 HeLa细胞人宫颈癌细胞 MC3T3-E1细胞小鼠胚胎成骨细胞前体细胞 MCF7 [MCF-7]细胞人乳腺癌细胞 MDA-MB-231细胞人乳腺癌细胞 MDA-MB-435S细胞人乳腺癌细胞 MDA-MB-453细胞人乳腺癌细胞 NG108-15 [108CC15]细胞小鼠神经母细胞瘤细胞与大鼠胶质母细胞瘤细胞之融合细胞 NIH/3T3细胞小鼠胚胎成纤维细胞 NTERA-2细胞人恶性多发性畸胎瘤细胞 P19细胞小鼠睾丸畸胎瘤细胞 PA-1细胞人卵巢畸胎瘤细胞 PA12细胞小鼠胚胎成纤维细胞 PANC-1细胞人胰腺癌细胞 PC-12 [PC12]细胞大鼠肾上腺嗜铬细胞瘤细胞 Saos-2细胞人成骨肉瘤细胞 SH-SY5Y细胞人神经母细胞瘤细胞 SK-OV-3 [SKOV3]细胞人卵巢腺癌细胞 U-2 OS [U2OS；U2-OS；U-2OS]细胞人骨肉瘤细胞 WEHI-3 [WEHI3]小鼠血细胞 Φ2细胞小鼠成纤维细胞 A-204细胞人横纹肌肉瘤细胞 Calu-3细胞人肺腺癌细胞 COS-7 [COS7]细胞非洲绿猴肾细胞（SV40转化） 一、细胞的冻存:为避免污染造成的损失，zui小化连续细胞系的遗传改变和避免有限细胞系的老化和转化，需要冻存哺乳细胞。冻存细胞前，细胞应该特性化并检查是否污染。 有几种普通培养基用来冻存细胞。对于包含有血清的培养基，成分可能如下： ◆包含10%甘油的*培养基， ◆包含10%二甲基亚砜（DMSO）的*培养基， ◆50%细胞条件培养基和50%含有10%甘油的新鲜培养基，或 ◆50%细胞条件培养基和50%含有10%二甲基亚砜的新鲜培养基。 对于无血清培养基，一些普通的培养基成分可能是： ◆50%细胞条件无血清培养基和50%包含有7.5%二甲基亚砜的新鲜的无血清培养基，或 ◆包含有7.5%二甲基亚砜和10%细胞培养级BSA的新鲜无血清培养基。 1.悬浮细胞 ●计数将要冻存的活细胞。细胞应该处于对数生长期。以大约200～400g离心5分钟沉淀细胞，使用移液管移去上清到zui小体积，不要搅乱细胞。 ●以1×107到5×107细胞/ml密度，在包含有血清的冷冻培养基中再次悬浮细胞，或者以0.5×107到1×107在无血清培养基中，再次悬浮细胞。 ●分装进冻存管，将冻存管置于湿冰上或放入4℃冰箱中，5分钟内开始冷冻步骤。 ●细胞以1℃/分钟进行冷冻，可以通过可编程序的冷冻器进行或者把隔离盒中的冻存管放到-70℃到-90℃的冰箱中，然后转移到液氮中贮存。 2.贴壁细胞 ●使用分离试剂从基层分离细胞，分离时尽可能温和，使对细胞的损伤减少到zui小。 ●在*生长培养基中，再次悬浮分离细胞，确定有活力细胞数。 ●以大约200g离心5分钟沉淀细胞。使用移液管移去上清到zui小体积，不要搅乱细胞。 ●以5×106到1×106细胞/ml密度，在冻存液中悬浮细胞。 ●分装进冻存管，将冻存管置于湿的冰上或放入4℃冰箱中，5分钟内开始冷冻步骤。 ●细胞以1℃/分钟进行冷冻，可以通过可编程序的冷冻器进行或者把隔离盒中的冻存管放到-70℃到-90℃的冰箱中，然后转移到液氮中贮存。 |
